葉綠體中色素的提取和分離

　　一、實驗原理

　　葉綠體中的色素能夠溶解在有機溶劑丙酮中，所以，可以通過研磨法用丙酮提取葉綠體中的色素(若無丙酮亦可用酒精代替)。

　　層析液（在60℃～90℃下分餾出來20份石油醚 + 2份丙酮 + 1份苯）是一種脂溶性很強的有機溶劑。葉綠體中的色素在層析液中的溶解度不同(溶解度高的隨層析液在濾紙上擴散得快；溶解度低的隨層析液在濾紙上擴散得慢。)，所以，可以用紙層析法分離出葉綠體中的色素。

　　二、目的要求

　　1.初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法。

　　2.探索葉綠體中有幾種色素。

　　胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b隨層析液在濾紙上擴散速度不同，可以分出四條色素帶。

　　三、重點與難點

　　重點:

　　1.初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法。

　　2.探索葉綠體中有幾種色素。

　　難點:

　　1.該實驗中應注意的問題。

　　2.培養學生獨立實驗的能力,掌握探究實驗的方法。

　　四、材料用具

　　新鮮的綠色葉片(如菠菜葉片)。

　　干燥的定性濾紙，燒杯(100mL)，研缽，小玻璃漏斗，尼龍布，毛細吸管，剪刀，小試管，培養皿蓋，藥勺，量筒(10mL)，天平。

　　丙酮，層析液，二氧化硅，碳酸鈣。

　　五、方法步驟(觀察錄象)

　　1.研磨  2.濾液   3.把濾液印在濾紙上(與教材不同)  4.層析

　　☆用毛細吸管劃線時間長易損傷紙纖維,效果欠佳,改用玻璃片印跡,效果好。

　　結論:葉綠體含有四種色素,胡蘿卜素在最上端,呈橙黃色；其次是葉黃素，呈黃色；中間是藍綠色的葉綠素a ；下端是黃綠色的葉綠素b。

　　注意:本實驗丙酮加入3mL足夠，研磨液用杵棒推擠，即可擠出較濃的色素提取液，連同糊狀物直接倒入小燒杯，不需過濾，但擠出的研磨液仍可稱為"過濾液"。

　　Ⅱ 隨堂演練

　　1.通過紙層析分離葉綠體色素，結果在濾紙條上出現四條色素帶，從上到下依次為（    ）

　　 A.胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b

　　 B.胡蘿卜素、葉綠素a、葉綠素b、葉黃素

　　 C.葉綠素b、葉綠素a、葉黃素、胡蘿卜素

　　 D.葉黃素、葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素

　　2.下列關于"葉綠體色素提取和分離"的實驗描述中，不屬于實驗要求的是 （    ）

　　 A.提取高等植物葉綠體中的色素    B.用紙層析法分離色素

　　 C.了解各種色素的吸收光譜       D.驗證葉綠體中所含色素的種類

　　3.用紙層析法將色素進行分離,在濾紙條上出現的最窄的一條色素帶的顏色是 （    ）

　　 A.黃色  B.橙黃色     C.黃綠色      D.藍綠色

　　4.提取葉綠體中的色素時要加丙酮，其原因是   （    ）

　　 A.讓色素溶解                   B.防止葉綠素被破壞

　　 C.便于將葉片研磨成勻漿         D.促使葉綠體中色素分離

　　5.在葉綠體色素的提取和分離實驗中，在濾紙條上擴散速度最快的色素是 （    ）

　　 A.葉綠素a     B.葉綠素b     C.胡蘿卜素     D.葉黃素

　　6.綠色植物的光合作用中，葉綠素是   （    ）

　　 A.光合作用的原料 B.光合作用的產物 C.能量轉換器     D.氫的接受器

　　7.右圖為用分光光度計測定葉片中兩類色素吸收不同波長光波的曲線圖，請判定A和B分別為何種色素（    ）

　　 A.葉綠素、類胡蘿卜素

　　 B.類胡蘿卜素、葉綠素

　　 C.葉黃素、葉綠素a

　　 D.葉綠素a、葉綠素b

　　8.將幾株相同的天竺葵放在不同的光下生長，其他條件

　　  都相同，一段時間后，生長狀態最差的應是（    ）

　　 A.藍紫光下的天竺葵          B.黃綠光下的天竺葵

　　 C.紅橙光下的天竺葵              D.紅光下的天竺葵

　　9.下列作用不屬于葉綠素的功能的是   （    ）

　　 A.吸收光能   B.利用光能使水分解 

　　 C.利用光能合成ATP   D.固定和還原二氧化碳

　　參考答案:1.A  2.C   3.B  4.A  5.C  5.C  6.A  7.B  8.D   9.D

　　Ⅲ　課后作業

　　1.實驗報告冊(實驗八)

　　2.能力提高練習

　　(1)在圓形濾紙的中央，點上葉綠體色素的提取液進行層析，隨著層析液從濾紙的中央向四周擴散，形成四個色素環帶，排在最里圈的色素是（    ）

　　A.橙黃色

　　B.黃綠色

　　C.藍綠色

　　D.黃色

　　(2)生物學家恩格曼將可見光通過三棱鏡后照射在絲狀綠藻上，

　　發現原來絲狀綠藻周圍均勻分布的好氧性細菌發生重新分布，

　　不同區域聚集著不同數量的細菌(如圖)，請分析回答:

　　①細菌重新分布時，主要聚集在           光投射區的綠藻周圍。

　　②發生這種現象的原因是，綠藻細胞中的葉綠素主要吸收           光，進行    作用，放出的           多，以滿足好氧型細菌的需要。

　　(3)在做"葉綠體中色素的提取和分離"實驗時，向研缽中加入SiO2的目的是     ，加入  CaC03的目的是           ；在盛有層析液的燒杯上蓋上培養皿蓋的目的是      ，在濾紙條上擴散速度最慢的色素帶是             ，其顏色是               。

　　(4)某同學在做"葉綠體中色素的提取分離"實驗時，操作情況如下所述，結果實驗失敗，請指出其錯誤所在:

　　①將5克新鮮完整的菠菜葉，放在研缽中，加入丙酮、石英砂、CaCO3以后，迅速研磨。

　　②用毛細吸管吸取少量濾液，沿鉛筆線處小心均勻地劃出一條濾液細線，并連續迅速地重復劃2～3次。

　　③把劃好細線的濾紙條插入層析液中，并不斷搖晃，以求加快色素在濾紙條上的擴散。

　　參考答案:1.(略) 2.(1)B  (2)(1)紅光和藍紫      (2)紅光和藍紫   光合  氧氣  (3)了使研磨充分  防止在研磨過程中，葉綠素受到破壞  防止層析液揮發葉綠素b黃綠色   (4)①未去除粗葉脈和將葉剪碎，這樣降低了葉綠素的提取率  ②上一次濾夜細線未干燥，即進行下一次劃線，使濾液線過粗或紙上色素量較低  ③由于搖晃，層析液接觸液線，溶解了色素。